小鼠神经干细胞购 🐴 买（小鼠神经干细胞的分离及培养 🪴 实验）
- 作者: 朱希柚
- 来源: 投稿
- 2025-02-23
1、小鼠神经干细胞购 🦄 买
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2、小鼠神经干细胞的分离及培养实验 🐅
实验目的分离并培养小 🌸 鼠神经干细胞，用于研究神经发生和再生等相关领域。
材 🪴 料和试 🌸 剂 🦆
材料68 周 🐕 龄小鼠 🌹
无 🌷 菌 🦈 工作台
解剖工具（剪刀 🦆 、镊子等）
50 mL 离心管 🌹
70% 乙醇 🕷
4% 多聚 🐕 甲醛 🐋 （PFA）
PBS 缓 🐵 冲液 🐎
细 🌳 胞分离培养基（含 10% FBS）
细胞培养板或培 🌾 养 🐎 瓶
CO2 培养 🕸 箱 🦋 （37°C，5% CO2）
显微镜试剂
神 🐕 经干细胞生 🐶 长因 🐘 子（EGF）
成纤维细胞 🍁 生长因 🌷 子（FGF）
丙酮酸谷 🦟 氨酰胺 🐧
N2 神经元补充 🌹 液
神经球形成培 🌷 养基（含 B27 补充液 🐯 ）
实验步骤1. 小鼠脑 🪴 组织获 🐼 取
在 🦉 无菌工作台中，处 🦈 ，死，小鼠切 🐦 除颅骨取出大脑。
2. 组织分离 🐺
将大脑组织置于 PBS 缓冲液中，用 🌵 剪刀和小镊子仔细去除脑膜和血管等多余组织。
切取海 🐛 马体和皮层组织，置于 50 mL 离心管中。
3. 酶 🐞 消化
加入含 EGF、FGF、丙、酮酸谷氨酰 🐬 胺、N2 神经元补充液的细胞分离培养基，以覆盖组织。
置于 🐟 37°C 水浴中 🐋 ，消化 30 分钟。
4. 机 🌼 械剪切
使用移 🐱 液枪尖轻轻剪切 🐳 组织，直至 🦊 悬液呈均质状。
5. 离心收集细 🌳 胞
4°C，1200 rpm 离心 5 分，钟收集上清液 🪴 。
6. 层 🐠 流 🐘 分 🌹 离
将 🌸 上清液移至新的离心管中，在离心 4°C，2000 rpm 分 5 钟，收集 🐞 上清液（含神经干 🦁 细胞）。
7. 细 🐺 胞 🦁 培养
将分离 🐞 出的细胞接种于铺有聚赖氨酸 🐺 的细胞培养板或培养瓶中。
加入含有 EGF、FGF、丙、酮酸谷 🍁 氨酰胺、N2 神经元补充液的细胞分离培养基。
置于 37°C，5% CO2 的 🐒 培养箱 🐈 中 🐠 培养。
8. 神经球形 🌳 成
待细胞贴壁后，更换为神 🦢 经球形成培养基。
培养 💮 710 天，观察神经球形 💐 成情况 🐬 。
实验结果酶消化 🐋 后，可得到单 💮 分散的神经干细 🕊 胞悬液。
经层 🦋 流分离后，上，清液中的细胞贴壁生 🐼 长形 🐈 成神经干细胞。
神经球形成培养基诱导下 🦉 神经，干细胞分化为神经 🕊 球 🐶 。
注意事项严格遵守 🐶 无菌操 🌲 作原则 🦁 。
酶消化时间应 🌴 根据组织大小和质地进行调整。
细胞培养 🕸 过程中要定期更换培养 🕷 基。
神经球形成 🦁 需在低氧环境下进 🐎 行（5% O2）。
3、神经干细胞临床成 🐡 功视 🕊 频
抱歉，我无法 🐧 分享该视频。
神经干细胞研究是一个新兴领域，临床研究仍处于早期阶段。目 🕷 。前。尚未有神经干细胞疗法获得监管机构的批准分享误导性或未经证实的视频可能会对科学理解和患者安全产生负面影响
如 🦍 果您有兴趣了解神经干细胞研究的最新进展，请咨询以下信誉良好的来 🐡 源：
[美国国立 🍁 卫生研究院 🐒 ]()
[美国国 🕷 立卫生研究院神经疾病和中风研究所 🐒 ]()
[国际神经干细 🐶 胞学 🦆 会]()
4、小鼠神 🕷 经干细胞提取 🦢 方法
小鼠神 🐈 经干细 🦄 胞 🦁 提取方法
材料：小鼠胚胎（妊娠 🌹 12.514.5 天）
无 🐎 菌操作台
无菌 🕷 培养皿
含 🐬 0.05% EDTA 的 🍁 PBS
神经干细胞 🐞 培养基（含有生长因子和 🐯 抗 🐵 生素）
胰蛋白酶消化液 🦊
离心机移液器 🦆 和枪 🐦 头
培养瓶步骤：
1. 无菌 🌴 操作和组织 🕸 准备 🐼 ：
在无菌操作台上 🦄 工作，对所有材料进行消毒。将小鼠胚胎用无菌 PBS 冲。洗。干净分离神经管
2. 神 🐟 经管 🐼 消化 🐒 ：
用胰蛋白酶消化液消化神经管 30 分钟，37°C 水浴。每毫升消化液消化 12 个神经管。每分钟 🐺 10 吹，打。一次促进消化
3. 离 🐠 心和收集 🪴 细胞：
消化后，在 300 x g 离心 5 分，钟收集细胞沉淀 🐦 。用 🦉 。神经干细胞培 🐟 养基洗涤细胞两次
4. 细胞培 🌾 养 🦅 ：
将细胞悬浮 🐼 在神经干细 🐠 胞培养基中，接种到培养瓶中。每 23 天。更换一 🌵 次培养基
优 🐟 化提示 🦁 ：
选择合适的发育阶段的小鼠胚胎 💮 ，以获 🦟 得最佳的神经干细胞产量 💮 。
优化消化 🦈 条件（时间和酶浓度）以实现有效的细胞释放。
使用高纯度的 🐘 胰蛋白酶消化液，避免细胞损 🐬 伤。
离心速度和时 🦅 间应足以 🐅 去除细胞碎 🐶 片。
定期监测细胞生长情况，并根据 🌵 需要更换培养 🌻 基。
使用合适的培养基和生长因子支持神经干细胞的自 🦟 我更新和增 🌷 殖 🦍 。
注意：与任何细胞培养一样，严格的无 🌴 菌技术至关重要 🌹 。
胚胎材料应从信誉良好 🌻 的来源获 🕷 得，并符 💐 合伦理指南。
穿戴适 🦈 当的个人防护装备。
